INTERNALIZAÇÃO DA HIPERICINA NANOENCAPSULADA NO FUNGO MICROSPORUM CANIS

Abstract

Introdução: Infecções originadas por Microsporum canis são caracterizadas por recorrência e o fracasso no tratamento varia entre 25-40% dos pacientes tratados. Esta lacuna, promove a busca por novas alternativas terapêuticas como a Inativação Fotodinâmica (IFD). Neste contexto, vem se destacado a utilização da hipericina nanoencapsulada em P123 (Hip-P123), como fotossensibilizador (FS). A Hip-P123 quando excitada em um comprimento de onda específico, na presença de oxigênio, promove reações fotoquímicas, desenvolvendo danos celulares e inativação de microrganismos. Neste sentido, o tratamento com IFD e Hip-123 poderia ser uma alternativa para a inativação do M. canis. Objetivo: Avaliar a absorção intracelular da Hip-P123 em células planctônicas de M. canis, para posterior IFT. Materiais e Métodos: M. canis foi suspenso a concentração de 1.105 conídios/mL. Posteriormente, 100 µl de Hip-P123 (12,5; 6,25 e 3,125 µMol) foram adicionados aos poços e levado a incubação por 2h no escuro à 25°C. Após a incubação, a suspenção foi lavada 2x e ressuspensa em salina estéril. A ligação e internalização da Hip-P123 aos microconídios foi avaliada por citometro de fluxo (BD FACSCaliburTM), emitindo um espectro de excitação na faixa de 550-750 nm. Para detectar a fluorescência do FS foram contados 10.000 eventos. Microconídios somente com salina foram utilizados como controle não-tratado. Resultados: Na análise por citometria de fluxo, a intensidade de fluorescência está correlacionada a internalização do FS. Nossos resultados demonstram que intensidade de fluorescência apresentada pelos microconídios tratados com Hip-P123 foi maior quando comparada as células não tratadas. Sendo que o tratamento com 12,5 e 6,25 µMol de Hip-P123 apresentaram fluorescência similar, corroborando com os resultados preliminares de atividade antifúngica. Conclusão: Estes resultados demonstram a absorção intracelular da Hip-P123 no M. canis, indicando a atividade do FS durante a inativação fotodinâmica.