Determination of Apixaban Levels in Human Plasma by a High-Throughput Liquid Chromatographic Tandem Mass Spectrometry Assay / Determinarea rapidă a apixabanului în plasma umană prin cromatografie de lichide de înaltă performanță cuplată cu spectrometrie de masă în tandem

Abstract

Abstract A high-throughput liquid chromatography method with detection by tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) was developed and validated for the quantification of apixaban in human plasma. The separation was performed on a Gemini-NX column under isocratic conditions using a 33:67 (v/v) mixture of acetonitrile and 1 mM ammonium formate in water at 40 ºC with a flow rate of 0.5 mL/min. The detection of apixaban was performed in multiple reaction monitoring mode (m/z 417.2 from m/z 460.2) with electrospray positive ionization. A single-step protein precipitation with methanol was used for plasma sample preparation. The method was validated with respect to selectivity, linearity (r > 0.994), intra-day and inter-day precision (CV < 14.4 %) and accuracy (bias < 9.5 %) over the range of 9.70 - 970.00 ng/mL plasma. The lower limit of quantification (LLOQ) was 9.70 ng/mL and the recovery was between 97.4 - 104.5 %. The method is fast, efficient, requires the processing of a small volume of plasma (50 μL), a short run-time (1 min) for chromatographic analysis, and a simple and rapid preparation of samples. It is very well suited for clinical therapeutic drug monitoring and pharmacokinetic studies. Rezumat S-a elaborat și s-a validat o metodă de cromatografie de lichide de înaltă performanță cuplată cu spectrometrie de masă în tandem (LC-MS/MS) pentru cuantificarea apixabanului în plasma umană. Separarea s-a realizat pe o coloană Gemini-NX în condiții izocratice folosind un amestec de acetonitril și formiat de amoniu 1 mM în apă (33:67, v/v) la 40 ºC, cu un debit de 0,5 mL/min. Detecția apixabanului s-a realizat prin monitorizarea reacțiilor multiple (m/z 417,2 din m/z 460,2) cu ionizare pozitivă prin electrospray. Pentru pregătirea probelor de plasmă s-a folosit o singură etapă de precipitare a proteinelor cu metanol. Metoda s-a validat cu respectarea selectivității, linearității (r > 0,994), preciziei intrazilnice și interzilnice (CV < 14,4 %) și a acurateței (bias < 9.5 %) pe domeniul de concentrații 9,70 - 970,00 ng/mL plasmă. Cea mai mică limită de cuantificare (LLOQ) a fost de 9,70 ng/mL, iar randamentul de recuparare din plasmă a avut valori cuprinse între 97,4 - 104,5 %. Metoda este rapidă, eficientă, necesită prelucrarea unui volum mic de plasmă (50 μL), un timp de lucru scurt (1 min) pentru analiza cromatografică și o pregătire simplă și rapidă a probelor. Se pretează foarte bine pentru monitorizarea concentrațiilor apixabanului în timpul tratamentului clinic și pentru studii de farmacocinetică.