Das Agar-Präzipitationsverfahren bei der Entenhepatitis, der Newcastle-Krankheit und besonders der klassischen Schweinepest — Seine Leistungsfähigkeit und Grenzen in der Virusdiagnostik —*

Zusammenfassung 1 Das Agar-Prazipitationsverfahren nach Ouchterlony gibt beim Nachweis des Virusprazipitiogens und der entsprechenden Prazipitine klare und spezifische Ergebnisse, sofern die notwendigen Kontrollsysteme eingeschaltet werden. Dies wird anhand des Testes bei der klassischen Schweinepest gezeigt. Eine wertvolle Hilfe leistet hierbei die Identitatslinie nach Ouchterlony, wodurch die Spezifitat der Reaktionen sichergestellt ist. Auszuschliesen sind gegebenenfalls durch Antigenverwandtschaft der Viren bedingte Kreuzreaktionen. Durch diese wird die Spezifitat des Testes eingeengt. 2 Prazipitinogene und Prazipitine nicht viraler Natur komplizieren den Agargel-Test und konnen zu Fehlbeurteilungen fuhren, da es in vielen Fallen nicht gelingt, das Virus von den im Nahrmedium vorhandenen Proteinen vollig zu trennen. Diese Verhaltnisse haben vermutlich bei der Entenhepatitis zu Fehlbeurteilungen Anlas gegeben. 3 Obgleich sehr empfindlich im Qualitativen, ist die Agar-Prazipitation nach Ouchterlony im Quantitativen anderen Antigen-Antikorperreaktionen unterlegen. Dies ist beispielsweise aus der hohen Diskrepanz der Hamagglutinin- und Prazipitinogentiter beim Newcastle-Virus abzuleiten. Die relative Unempfindlichkeit in quantitativer Hinsicht ermoglicht unter bestimmten Voraussetzungen bei der Newcastle-Krankheit die Abgrenzung vakzinationsbedingter Titer von Infektionstitern in Huhnerseren. 4 Eindeutige Ergebnisse lassen sich im phenolhaltigen Diffusionsmedium nur erzielen, wenn weitgehend von Lipoiden gereinigte Seren benutzt werden. Die bei der klassischen Schweinepest in der Literatur vertretene Ansicht uber „falsch positive” Reaktionen bei der Untersuchung von Pankreasproben gesunder Schweine wird auf die Verwendung nicht lipoidfreier Seren zuruckgefuhrt. 5 Auch bei der Virusprazipitation im Agargel ist mit dem Zonenphanomen zu rechnen. Hieraus ergibt sich die Notwendigkeit, beim Nachweis des Prazipitinogens mit mehreren Verdunnungen des Testserums zu arbeiten. Dies bestatigte sich bei Untersuchungen an diagnostischem Material der klassischen Schweinepest. Der Antigengehalt in etwa ein Drittel der Bauchspeicheldrusen wurde erst mit Verdunnungen des Testserums erfast, weil er in Relation zum unverdunnten Serum zu gering war. 6 Die Leistungsfahigkeit des Testes in der Routinediagnostik wird am Modell der klassischen Schweinepest demonstriert. Er stellt zur Zeit bei dieser Krankheit die einzige serodiagnostische Methode dar, die in jedem Fall in einem Bestand eine spezifische Diagnose ermoglicht. Summary The agar precipitation test in duck hepatitis, Newcastle disease and particularly classical swine fever—its functional capacity and limitations in virus diagnosis 1 So long as the necessary control systems are included, Ouchterlony's agar precipitation test gives clear and specific results. These are illustrated in classical swine fever. Valuable assistance is obtained from the lines of identity which ensure the specificity of the reactions. Cross-reactions as a result of related viruses are sometimes a problem and interfere with the specificity of the test. 2 Precipitinogens and precipitins of non-virual nature complicate the test and can lead to false results as it may not be possible in many cases to distinguish between the virus and proteins present in the medium. This is probably the reason for failures in the case of duck hepatitis. 3 Although the test is very effective qualitatively it is not so effective quantitatively as other antigen-antibody reactions. This accounts, for example, for the considerable discrepancy between the haemagglutinin and precipitinogen titres with Newcastle disease virus. The relative insensitiveness quantitatively makes it possible under certain conditions to distinguish in Newcastle disease between titres produced by vaccination and those resulting from infection. 4 Clear results with diffusion media containing phenol can be obtained only with sera freed from lipoids. Reports of false positive reactions in the literature dealing with classical swine fever in pancreas tests from healthy pigs were probably attributable to the use of sera which were not free from lipoids. 5 The agar gel test is also susceptible to the zone phenomenon and this makes it necessary to use several dilutions of the test serum when demonstrating the precipitinogen. Classical swine fever provides an example. In about one-third of pancreases the antigen is detected only when dilutions of the test serum are used because its concentration is too low to react with undiluted serum. 6 The value of the test in routine diagnosis is demonstrated with the model of classical swine fever in which at the present time it is the only method of serological diagnosis which permits a specific diagnosis in each case in a herd. Resume Le test de precipitation sur gelose dans l'hepatite des canetons, la maladie de Newcastle et surtout la peste porcine classique. — Ses possibilites et ses limites dans le diagnostic des maladies a virus 1 Le test de precipitation sur gelose selon Ouchterlony donne des resultats clairs et specifiques pour la mise en evidence du precipitinogene du virus et des precipitines correspondantes, a condition d'utiliser des systemes de controle appropries. La ligne d'identite d'Ouchterlony represents a cet effet une aide precieuse et garantit la specificite de la reaction. 2 Au cours de recherches personnelles, l'auteur ne put decouvrir aucune reaction specifique pour le virus de l'hepatite des canetons. 3 Bien que qualitativement tres sensible, le precipito-diagnostic sur gelose selon Ouchterlony est inferieur du point de vue quantitatif a d'autres methodes de reaction antigene-anticorps. Dans la maladie de Newcastle, cette insensibilite relative permet de distinguer dans des conditions determinees, les titres seriques post-vaccinaux des titres consecutifs a une infection. 4 On ne peut obtenir des resultats certains dans un milieu de diffusion contenant du phenol que si l'on utilise des serums exempts de lipoides suffisamment purifies. Dans le cas de la peste porcine classique, l'opinion souvent exprimee concernant des reactions positives trompeuses lors d'analyse de specimens de pancreas de porcs sains est due a l'emploi de serums contenant des lipoides. 5 Meme dans le precipito-diagnostic du virus sur gel d'agar-agar, il faut compter avec les phenomenes de zones. D'ou la necessite, selon les experiences de l'auteur, au moins pour le cas de la peste porcine classique, de travailler avec plusieurs dilutions de serum-test pour la mise en evidence du precipitinogene. 6 Le test sur gel d'agar-agar represente actuellement dans la peste porcine la seule methode de sero-diagnostic qui permette dans tous les cas un diagnostic specifique dans une porcherie. Resumen La tecnica de precipitacion en agar en la hepatitis del pato, la enfermedad de Newcastle y, en especial, en la peste porcina clasica. Su capacidad de rendimiento y limites en el diagnostico virosico 1 La tecnica de precipitacion en agar segun Ouchterlony ofrece en la identificacion del precipitinogeno virosico y de las precipitinas correspondientes unos resultados claros y especificos, siempre y cuando se intercalen los sistemas precisos de control. La linea de identidad segun Ouchterlony proporciona aqui una ayuda muy valiosa, con lo cual se salvaguarda la especificidad de la reaccion. 2 En investigaciones propias no se pudieron lograr reacciones especificas de virus en la hepatitis de los patos. 3 Aunque muy sensible en cuanto a la calidad, la precipitacion en agar segun Ouchterlony resulta inferior a otras reacciones antigeno-anticuerpo. Esta relativa insensibilidad en el aspecto cuantitativo permite, bajo determinadas condiciones previas, delimitar en la enfermedad de Newcastle los titulos condicionados por vacunacion de los titulos debidos a infeccion en sueros sanguineos de gallinas. 4 Resultados inequivocos solo se obtienen en el medio de difusion, que contiene fenol, cuando se emplean sueros purificados de lipoides a suficiencia. El punto de vista admitido en la peste porcina clasica por parte de la bibliografia sobre reacciones “positivas falsas” en el examen de muestras pancreaticas de cerdos sanos se atribuye al empleo de sueros no liberados de lipoides. 5 Tambien en la precipitacion virosica en gel de agar debe contarse con el fenomeno de zona. De aqui se desprende, con arreglo a las experiencias hechas hasta la fecha, al menos en lo concerniente a la peste porcina clasica, la necesidad de trabajar en la identificacion del precipitinogeno con varias diluciones del suero problema. 6 La prueba en gel de agar es, hoy por hoy, en la peste porcina el unico metodo serodiagnostico que en cada caso permite establecer un diagnostico especifico en cualquier explotacion.