miR-335靶向Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1抑制人骨肉瘤细胞MG-63侵袭转移的实验研究

背景与目的：微小RNA（microRNA，miRNA）是一类小分子内源性RNA，主要在转录后水平调节靶基因的表达。microRNA-335（miR-335）作为一种肿瘤抑制因子，参与了多种人类肿瘤的发生、发展过程。本研究旨在探讨miR-335是否靶向抑制Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶1（Rho associated coiled-coil forming protein kinase，ROCK1）基因的表达，并以此调控人骨肉瘤细胞MG-63侵袭及转移。方法：理论预测并通过荧光素酶基因报告验证miR-335与ROCK1基因的3＇-非翻译区（untranslated region，UTR）的特异性结合作用；real-time PCR和蛋白质印迹法（Western blot）分别从基因和蛋白水平检测miR-335对ROCK1表达的负性调控作用；Transwell小室法检测miR-335过表达及下调ROCK1表达后MG-63侵袭及转移能力的变化。结果：Targetscan预测显示，miR-335与ROCK13＇-UTR存在结合位点。荧光素酶基因报告实验结果显示，miR-335 mimic和ROCK13＇-UTR能够靶向结合；miR-335在MG-63细胞中低表达，ROCK1则呈高表达。Western blot检测结果显示，转染miR-335 mimic或转染ROCK1 siRNA后ROCK1的蛋白表达减少。Transwell小室法检测结果显示，过表达miR-335或下调ROCK1后穿过基膜的细胞数目明显下降。结论：miR-335能特异性结合于ROCK1基因的3＇-UTR并下调ROCK1的表达，抑制人骨肉瘤细胞MG-63侵袭转移。