引用次数: 1
摘要
摘要头孢菌素- c酰化酶(CCA)在头孢菌素- c一步转化为7-ACA的过程中起着重要作用。纯化过程旨在提高CCA酶的比活性。提纯开始于细胞裂解，硫酸铵沉淀，透析，离子交换层析(IEC)和尺寸排除层析。并对梯度和等温洗脱步骤进行了IEC优化。纯化后酶纯度可提高33.66倍，比活性为3.00 U/mg，产率达41.41%。在电泳过程中，等压洗脱比梯度批洗脱效率更高(时间更短，仅需3柱体积(CV))(高达9 CV)。SDS-PAGE分析表明，重组CCA酶存在两种类型，含有α-亚基(25 kDa)和β-亚基(58 kDa)的活性酶和以83 kDa为前体的失活酶。此外，30%硫酸铵饱和沉淀能够沉淀这种无活性的CCA。【关键词】7-ACA,CCA，头孢菌素C，蛋白纯化，比活性【摘要】头孢菌素C溶酶(CCA);研究纯化脑膜炎病毒活性特异性酶CCA的方法。本文主要研究了硫化铵的提纯、硫化铵的提纯、硫化铵的提纯、硫化镍的提纯、硫化镍的提纯、硫化镍的提纯、硫化镍的提纯。Optimasi提出了一种新的iecpa方法，该方法可以使elusii - juga - dilakukan - untuk和elusii酶- CCA - secara梯度和异质化。研究结果表明:纯化的牛脑膜炎酶33,66 kali，活性的牛脑膜炎酶33,00u /mg，而纯化的牛脑膜炎酶41,41%。Hasil optimasi IEC方法处理了elusi secara isokratik lebih efisien dari segi waktu (hanya membutuhkan) 3 kolom volume (CV) dibandingkan dengan secara gradient (sampai 9 CV)。Hasil SDS-PAGE menunjukkan bahwa CCA rekombinan merupakan酶dengan 2 macam bentuk yitu酶aktif, yang terdiri dari亚基α (25 kDa) dan β (58 kDa)， dan酶tidak aktif berupa前体(83 kDa)。研究了硫酸铵的制备方法，研究了硫酸铵的30%热饱和度，研究了硫酸铵的前体CCA。Kata Kunci: 7-ACA，活性菌特异性，CCA，纯化蛋白，sefalosporin C本文章由计算机程序翻译，如有差异，请以英文原文为准。
PEMURNIAN ENZIM SEFALOSPORIN-C ASILASE DAN OPTIMASI PROSES KROMATOGRAFI PENUKAR ION
Purification of Cephalosporin-C Acylase and Its Optimization of Ion-Exchange ChromatographyABSTRACTCephalosporin-C acylase (CCA) has an important role in the one-step conversion of cephalosporin-C into 7-ACA. Purification process aims to increase specific activity of CCA enzyme. Purification began with cell lysis, ammonium sulphate precipitation, dialysis, ion exchange chromatography (IEC) and size exclusion chromatography. IEC optimization of elution step was also done to compare gradient and isocratic elusion. Purification was capable to increase the enzyme purity upto 33.66 fold, with specific activity of 3.00 U/mg and the yield reached 41.41%. Optimization of elusion during IEC showed that isocratic protein elusion was more efficient (taking shorter time, 3 column volume (CV) only) than that of gradient batch (up to 9 CV). SDS-PAGE analysis demonstrated that the recombinant CCA enzyme existed in two types, active enzyme containing α-subunit (25 kDa) and β-subunit (58 kDa), and inactive enzyme (83 kDa) as precursor. Furthermore, 30% ammonium sulphate saturated precipitation was able to precipitate this inactive CCA.Keywords: 7-ACA,CCA, cephalosporin C, protein purification, specific activity ABSTRAKSefalosporin-C asilase (CCA) merupakan enzim yang berperan penting dalam konversi satu tahap sefalosporin-C menjadi 7-ACA. Proses purifikasi merupakan salah satu cara untuk meningkatkan aktivitas spesifik enzim CCA. Proses purifikasi dimulai dari memecah sel, diikuti dengan tahap presipitasi menggunakan amonium sulfat, dialisis, kromatografi penukar ion (IEC) dan kromatografi eksklusi. Optimasi proses IEC pada tahap elusi juga dilakukan untuk membandingkan elusi enzim CCA secara gradien dan isokratik. Proses purifikasi pada penelitian ini mampu meningkatkan kemurnian enzim hingga 33,66 kali, dengan aktivitas spesifik sebesar 3,00 U/mg dan perolehan enzim sebesar 41,41%. Hasil optimasi IEC pada proses elusi secara isokratik lebih efisien dari segi waktu (hanya membutuhkan 3 kolom volume (CV) dibandingkan dengan secara gradien (sampai 9 CV). Hasil SDS-PAGE menunjukkan bahwa CCA rekombinan merupakan enzim dengan 2 macam bentuk yaitu enzim aktif, yang terdiri dari subunit α (25 kDa) dan β (58 kDa), dan enzim tidak aktif berupa prekursor (83 kDa). Proses presipitasi menggunakan amonium sulfat 30% tersaturasi dapat mengendapkan prekursor CCA.Kata Kunci: 7-ACA, aktivitas spesifik, CCA, purifikasi protein, sefalosporin C
求助全文
通过发布文献求助，成功后即可免费获取论文全文。
去求助
求助内容：
应助结果提醒方式：
京公网安备 11010802042870号
