Réponses analytiques aux intoxications par substances végétales

Abstract

Environ une quarantaine de plantes (genre ou espece) sont responsables de 95 % des deces publies dans la litterature lors d'intoxication par les plantes. Bien que la plupart de ces toxiques soient mal connus, les molecules actives en cause peuvent etre detectees par des methodes analytiques telles que la chromatographie en phase gazeuse ou la chromatographie en phase liquide. Les methodes analytiques publiees ne sont pas nombreuses et souvent peu sensibles ou peu specifiques ou encore dediees a quelques molecules ou metabolites. Nous avons developpe une methode generale pour la detection des principaux toxiques dans le sang total par chromatographie liquide couplee a la spectrometrie de masse simple ou tandem. L'extraction des molecules en liquide-liquide est conduite a pH 9,5 pour l'oleandrine, le paclitaxel et certains alcaloides. Les alcaloides bases faibles necessitent une purification acide /base supplementaire. L'Atractyloside est isole par precipitation des proteines a l'acetone et lavage par une phase organique. La separation chromatographique s'effectue en phase inverse sur colonne C18 150x2 mm i.d., 5µm d.p. au moyen de deux phases mobiles a differents pH. Un tampon formiate d'ammonium 2mM acidifie a pH 3 est utilise pour la separation de l'atractyloside, de l'oleandrine et du paclitaxel et certains alcaloides. Un tampon formiate 10 mM a pH 8,2 est utilise pour la majorite des autres alcaloides. Le gradient d'elution utilise l'acetonitrile. La detection en mode positif est le mode de choix pour la majorite des alcaloides excepte pour l'atractyloside (mode negatif) et le paclitaxel (deux modes possibles). L'application a des cas medico-legaux est presentee ici.